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高速离心机在质粒提取中的重要应用

时间:2018年05月14日浏览:331次转载:www.sklxj.com收藏分享:

质粒是基因工程中最常用的运载体,担负着将目的基因转移到宿主细胞中的重要使命。高速离心机对从细菌中分离质粒有非常重要的作用。以下是一实验室质粒提取的步骤,使用蜀科TD-20高速离心机进行操作:

1、将扩增好的菌液重悬,转入1.5mL离心管中;

2、用质粒小量抽提试剂盒,按说明书要求提取质粒;

3、细菌高速离心1min,彻底去除上清;

4、加入250ulRB溶液,振荡器充分悬浮细菌;

5、加入250ulLB溶液。立即上下颠倒10次,使细菌裂解,室温,放置2min;

6、加入250ulNB溶液。立即上下颠倒10次,使之充分中和,室温,放置2min;

7、室温,15000rpm,蜀科高速离心机离心15min;

8、将吸附柱放入收集管内,离心得到的上清转移至吸附柱,室温,15000rpm,蜀科高速离心机离心30s; 

9、弃废液,将吸附柱放入收集管,加入700uL WB溶液到吸附柱中,15000rpm,蜀科高速离心机离心30s;

10、重复上一操作;

11、将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中,加30-50uL预热的Elution Buffer,室温,放置2min,高速离心1min;

12、样品进行电泳检测:1%琼脂糖凝胶电泳,上样量为2uL,紫外灯下观察,最明亮的带为超螺旋形式,可以在一定程度上表明提取质粒的纯度。

质粒提取是基因工程最基础的一步,高速离心机的运用非常频繁,蜀科高速离心机全系采用转头识别技术,有效防止转头超速运转,保护机器和人员安全,技术性能位居行业前列,欢迎选购!

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